我校于2014年8月底在江宁校区G实验楼2楼建成了约600平方米的 《细胞与分子生物学实验平台》。是中国医科大学基础医学与临床药学学院的校级服务平台，是学院9大平台之一。学院科学研究工作将紧密结合临床，以重大疾病的病因、药物的作用机制为基础、以合理化用药、精准治疗为导向，以创新药物的研究及成果转化为特色，不断提升学院科学研究水平，实现菲律宾金百利国际真人游戏引领、科技创新驱动，促进自主创新药物的研发。目前学院拥有校级以上科研服务平台9个，将为学院在师资队伍、学科建设、科学研究、教学改革、人才培养和人才引进等方面提供强大的支撑，为学校及学院教师的科学研究提供良好的服务。

一、 平台建设目的

为满足我校广大师生的教学及科研需求，我校于2014年8月底在江宁校区G实验楼建成了“细胞与分子生物学实验平台”，平台占地面积约600平方米，购置了1200余万元的仪器设备，其中包括激光共聚焦显微镜、测序仪、荧光显微镜、流式细胞仪、荧光定量PCR、多功能酶标仪、微孔板检测仪等大型精密仪器及二氧化碳培养箱、三气培养箱、生物安全柜、半干转印系统、凝胶成像系统等细胞分子生物学常用仪器。

 二、平台建设目标任务

针对目前广大师生对仪器设备，特别是大型精密仪器设备有较高需求的现状，应采取有力措施，通过合理规划和论证，集中资金加强开放度高的公用大型仪器设备平台的建设，充分利用现代信息与网络技术，建立管理科学, 布局与结构合理的设备共享平台，促进联合、共建、共享、共用，面向校内外开放，努力提高学校投资效益, 更好地为学校的高水平人才培养，科学研究以及社会经济发展服务。

三、 平台人员组成

• 平台主任1人（闻晓东）

• 平台副主任1人（戴琴昇）

• 平台技术人员6-8人（孙敏慧、马晓楠、侯英剑、李小芩）

• 中心保洁人员1人（待定）

四. 平台管理的基本框架

五、中心职员的职责与任务

1. 平台主任的职责（正式编制）

负责细胞与分子生物学实验平台的全面工作，包括近期、远期规划，中心人员的任命和财务安排等，与学校签订岗位责任书。

2. 平台副主任的职责（正式编制）

协助平台主任管理实验室的全面工作，负责平台的日常管理的监督，并协助参与技术员的研究工作，与平台主任签订岗位责任书。

3. 平台技术人员职责（正式编制）

掌握细胞培养的实验技术、方法及应用。负责平台的大型仪器管理、维护及使用。负责平台的分子生物学实验室的实验及应用技术。平台的日常事务工作，包括对外联系，档案管理， 文件的起草，监控系统的维护等，并协助平台主任管理参与管理；与平台主任签订岗位责任书。

4. 保洁人员职责：

负责平台的全面卫生工作，与平台主任签订岗位责任书。

六、平台一览和开放服务

大型精密仪器1室

大型精密仪器2室

大型精密仪器3室

大型精密仪器4室

大型精密仪器室缓冲间

分析仪器室

细胞培养中心

分子生物学实验室

自2015年正式开放以来，平台建立了基于LIMS信息管理系统的开放共享体系，为广大师生的教学及科研提供了良好的技术服务、创新技术方法开发和资源分享。数据显示，平台大型仪器设备、设施均得到了有效开放，其中细胞培养室、共聚焦显微镜、荧光显微镜及流式细胞仪等设备分别开放了2160 h，2058 h，500 h 和300 h；平台开展了细胞培养、分子生物学及共聚焦显微成像等多项培训，共计506人次。

大型仪器共享平台LIMS信息管理系统

流式细胞检测服务及理论培训

平台大型仪器开放共享与技术培训服务

七、平台的的主要仪器设备

1、大型仪器设备一览表

表1-大型仪器设备

2、大型仪器简介

激光共聚焦显微镜

工作原理

以激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦原理和装置，并利用计算

机采集和处理光信号后进行分析和输出。激光共聚焦扫描显微镜既可以用于观察细胞形态，也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计以及细胞形态的测量, 配合活细胞工作站系统可以实现长时间活细胞动态观察。

基本信息

• 厂家：Zeiss公司

• 型号：LSM 700

仪器特点

• 借助全自动硬件实现快速扫描；

• 激光器寿命延长装置能节约激光共聚焦显微镜的操作成本；

• VSD 分光镜可实现光谱成像：在 LSM 700 的两个检测器之间以 1 nm 的步进来拆分发射光；

• FixGATE 主分光镜能有效地分离发射光和激发光：从而获得具有高灵敏度和最佳信噪比的高品质图像；

• 配有全电动高精度针孔，可根据照明和检测波长自动调整孔径大小和位置。

主要技术指标

• 荧光倒置显微镜：具有明场、荧光、DIC观察方式；

• 物镜：10x 、20x、40x、63x(油镜) ；

• 激光配置：405nm、488nm、555nm、639nm ；

• 活细胞培养系统等。

激光共聚焦显微镜

工作原理

以激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦原理和装置，并利用计算

机采集和处理光信号后进行分析和输出。激光共聚焦扫描显微镜既可以用于观察细胞形态，也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计以及细胞形态的测量, 配合活细胞工作站系统可以实现长时间活细胞动态观察。

基本信息

• 厂家：Leica 公司

• 型号：TCS SPE II

仪器特点

• 双通道荧光图像采集和自动叠加；

• 时间序列扫描等；

• 组织切片、活细胞的荧光标记、三维图像重建；

• 细胞生物物质、离子的定性、定量、定时和定位分布检测等。

主要技术指标

• 荧光倒置显微镜：具有明场、荧光、DIC观察方式；

• 物镜：10x 、20x、40x、63x(油镜) ；

• 激光配置：405nm、488nm、555nm、639nm ；

• 扫描头：生物型扫描头Biocatalyst /通用型扫描头Multimode V ；

• 活细胞培养系统。

流式细胞仪

工作原理

流式细胞仪利用光学和电学原理能够快速、精确的对单个细胞（或生物学颗粒）的理化特性进行多参数定性和定量分析。

基本信息

• 厂家： Miltenyi 公司

• 型号： MACSQuant Analyzer 10

仪器特点

• 绝对细胞计数：使用机械臂可进行精确的容积吸取

• 多参数流式分析：8个荧光通道，2个散射通道

• 稳定的光学系统: 三种强激光 (紫色，蓝色，红色) 安全地固定于光学组件中

• 荧光染料选择范围广，可进行多色细胞分析

• 稀有细胞分析：可在流式分析前自动预富集稀有细胞。如抗原特异性T细胞、循环肿瘤细胞等稀有细胞群的表型可由流式细胞仪可靠地、简便地鉴定。

主要技术指标

• 激光：3根空气冷却激光（激发波长：405nm，488nm，635nm）；

• 可选参数：FSC，SSC和八个荧光通道；
  分析速率：高达104events/second（结合MACS® 富集单元可高达106events/second）；

• 荧光分辨率：<5% CVs(FITC/PE/APC)；

• MACS® 细胞富集单位：预富集稀有细胞群体用于分析；

• 样本摄取：摄取仓（可沿y/z轴运动）配备浸入传感器和自动清洗站。

超速离心机

工作原理

超速离心技术是细胞与分子生物学研究中不可缺少的技术手段，超速离心机是完成各种核酸、蛋白、细胞及细胞器分离、纯化最方便有效的工具。

基本信息

• 厂家：Beckman Coulter 公司

• 型号：L-80XP

仪器特点

• 真空密封驱动系统，大大减低轴的磨损；

• 高效脱水式真空系统，具备水气排除功能；

• 转头动态惯性检测，增加操作者的安全性；

• 软件以及专利设计的 ESP高效沉降程序可做模拟分离。

主要技术指标

• 最大转速：80000rpm；

• 最大离心力：602,000g；

• 独有特大12寸触幕式（Touch-Screen）操作；

• 可配HEPA高效微粒隔离膜，确保仪器排出气体无细菌；

• 可配特别离心管- OptiSeal管、Konical 管、g-max管和Quick-Seal管提高工作效率。

高灵敏度化学发光成像系统

工作原理

化学发光成像系统以高分辨率和高灵敏度的 CCD 作为成像检测技术基础，支持多种检测方法，包括荧光，比色，化学发光和化学荧光等，满足绝大多数样品检测。

基本信息

• 厂家：Bio-Rad公司

• 型号：ChemiDoc XRS+

仪器特点

• 凝胶和印迹膜成像快速且分析准确；

• 在数秒内自动完成蛋白质和 DNA 样品的全部的定量分析；

• ChemiDoc XRS+ 系统具有比对分析不同批次实验数据的功能，改善了实验数据的重复性，确保数据的可靠性；

• 在普通荧光和比色法检测功能的基础上，ChemiDoc XRS+ 系统还具备灵敏快速的化学发光检测功能，能检测到样品发出的微弱信号；

• 该系统使用了信号累积成像模式 (SAM)，引导用户优化最佳曝光时间获得最佳化学发光样品图像。

主要技术指标

• 激发光源：标准透射紫外（302 nm 标配；254 nm和 365 nm 选配）和反射白光，透射白光选配，自带电源；XcitaBlue™紫外光/蓝光转换屏选配；

• 光源控制：5 种模式（透射紫外，反射白光，选配透射白光，适用化学发光的光源，选配 XcitaBlue 蓝光转换；

• 检测器：超冷 CCD；冷却系统：Peltier；CCD 冷却温度：-30℃（受控）；

四级杆串联飞行时间质谱仪（Q-TOF/MS）

工作原理

Q-TOF/MS的基本结构包括:进样系统(LC)、离子源、质量分析器、检测器，样品在色谱部分和流动相分离，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图。液质联用体现了色谱和质谱优势的互补，将色谱对复杂样品的高分离能力，与MS具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来。

基本信息

• 厂家：Aglient

• 型号：6545

仪器特点

• 自动调谐技术有助于保留不稳定化合物以便改进检测；

• 全新的安捷伦高压脉冲发生器和电源提高了质量分辨率性能；

• 使常规筛查具有极高可靠性，满足化合物鉴定所需的灵敏度要求；

• 全新的快速自动调谐将小分子应用的灵敏度最高提升了 5 倍；

• 增强的增益漂移检测器将使用寿命延长了 3 倍。

主要技术指标

• 分辨率20000;

• 质量准确度小于5ppm

3、常规仪器设备一览表

表-1分子生物学实验室（233、240室）

表2-细胞培养中心

4、仪器设备标准操作规程（SOP）

1.Thermo水套培养箱操作规程（3111型）……………………………………00

2.Thermo水套培养箱操作规程（3131型）……………………………………00

3.Thermo生物安全柜操作规程（1300A2型）…………………………………00

4.Bio-Rad化学发光凝胶成像仪操作规程（Chemidoc XRS+型） ……………00

5.Thermo 酶标仪操作规程（Multiskan FC 型）………………………………00

6.Miltenyi 流式细胞仪操作规程（MACSQuant Analyzer 10）…………………00

7.Bio-Rad核酸蛋白测量仪操作规程（Smart Spec plus 型） …………………00

8.Bio-Rad 半干转印系统操作规程（Trans-Blot SD 型）………………………00

9.倒置生物显微镜操作规程（XDS-1B 型）……………………………………00

10.Thermo 纯水仪操作规程（Genpure UV/UF 型）……………………………00

11.Olympus显微镜操作规程（IX 53 型）………………………………………00

12.Zeiss激光共聚焦显微镜（LSM 700）…………………………………………00

13.Bio-Rad半干及湿式转印系统（Trans-Blot SD 型）…………………………00

14.Eppendorf台式多功能高速离心机（5430 型）………………………………00

15.Eppendorf台式多功能高速离心机（5810R 型） ……………………………00

16.四级杆串联飞行时间质谱仪（6545型）………………………………………00

（正式稿确定后再加页码~）

Thermo水套培养箱操作规程（3111型）

• 培养箱条件设置

• 温度：37 ℃

• CO₂   浓度：5%

• 相对湿度： 约为 95%

• 如果个别细胞培养需要特殊条件，请与仪器负责人联系

• 使用注意事项与日常维护

• 培养箱专供细胞培养用，严禁放入其他物品，以防污染；

• 细胞培养板或培养皿请勿堆砌过高，以防打翻；

• 如不慎有培养基洒出，需及时清理消毒并更换底部托盘中的灭菌水，以防污染，同时金百利国际娱乐菲律宾真仪器负责人；

• 二氧化碳气瓶分压阀的读数应为 0.04-0.06；二氧化碳气瓶总阀正常读数为5-6，低于该数值说明余量不多，需尽快更换新的气瓶；未经允许请勿调节安全阀；

• 培氧箱在使用时，需定期检查增湿盘内是否缺水，如果缺水请务必加灭菌蒸馏水；

• 培养箱使用时应把减压阀出气压力调到0.06Mpa,最大不能超0.1Mpa；

• 如果报警显示Add Water,表示设备里的水套缺水,应用蒸馏水并使用附件提供的漏斗一直加到设备不报警为止；

• 如果显示Replace HEPA, 只是提醒需要更换箱内高效过滤器,不是表示设备有问题,如果不想更换可以照常使用；

• 如果不用二氧化碳，请把二氧化碳设定到零点，否则过15分钟后会报警；

• 培养箱在使用时，室内温度要保持在28℃以下，特别是夏天需要24小时开空调，否则设备会超温报警；

• 可用70％酒精或中性不含氯的消毒剂给培养葙培养室作定期的常规消毒；

• 培养箱如果长期不使用，请切断电源和CO₂，把增湿盘拿出来并且把箱内擦干净。

Thermo水套培养箱操作规程 （3131型）

• 参数设定

• 温度设定：按“Mode”键使“ Set ”下指示灯亮，按“ ←”“→”键使显示“TEMP XX.X C”， 按“ ↓” “↑”键使显示所需设定的目标温度（如37.0℃），按“Enter”确定。按“Mode”键3次使“ RUN”下指示灯亮。

• CO₂浓度设定：按“Mode”键使“ Set ”下指示灯亮，按“ ←”“→”键使显示“CO₂XX.X ”， 按“ ↓” “↑”键使显示所需设定的目标浓度（如5%），按“Enter”确定。按“Mode”键3次使“ RUN”下指示灯亮。

• 高温报警设定：按“Mode”键使“ Set ”下指示灯亮，按“ ←”“→”键使显示“OTEMP XX.X C”， 按“ ↓” “↑”键使显示所需设定的目标温度（如38.0℃），按“Enter”确定。按“Mode”键3次使“ RUN”下指示灯亮。

• O₂浓度设定：按“Mode”键使“ Set ”下指示灯亮，按“ ←”“→”键使显示“O₂XX.X ”， 按“ ↓” “↑”键使显示所需设定的目标浓度（如2%），按“Enter”确定。按“Mode”键3次使“ RUN”下指示灯亮（如果将O₂浓度设定到21%，可当成普通CO₂培养箱使用）。

• O₂浓度校准：按“Mode”键使“CAL ”下指示灯亮，按“ ←”“→”键如显示O₂ CAL@ 20.7%，按“Enter”确定，机器显示“OPEN DOOR“，打开门，机器显示“CALIBRATING”等两分钟。当机器再次显示“O₂ CAL@ 20.7%”校准完成。按“Mode”键3次使“ RUN”下指示灯亮。

Thermo生物安全柜操作规程（1300A2型）

• 操作步骤

• 将仪器电源线插入电源插座；

• 按on键约3秒仪器开机；

• 将操作窗抬至指定位置，风机自检；

• 打开日光灯电源；

• 操作工作完成后，将操作窗往下拉到指定位置；

• 按UV约3秒至紫外灯亮；

• 打开紫外灯开关进行消毒灭菌。消毒完成后，紫外灯自动熄灭；

• 长按on键至面板不显示，仪器进入待机状态。

Bio-Rad化学发光凝胶成像仪操作规程（Chemidoc XRS+型）

• 注意事项

• 开机时，先接通凝胶成像仪电源和CCD电源，再打开软件，如需立即使用化学发光功能，需预冷10min。

• 关机时，先关闭软件，再切断凝胶成像仪电源和CCD电源，最后关闭电脑。

• 使用化学发光无光源拍摄时请将滤光片位置调为“0”号位。

• 使用紫外或白光进行拍摄时请将滤光片位置调为“1”号位。

• 紫外灯箱石英屏上不能超过10ml液体，使用后请及时使用酒精清理。

• 如使用此仪器进行紫外切胶实验，请使用原装标配的紫外防护板，请尽量保护石英屏，紫外切胶时间不宜超过10min。

• 操作规程

• 打开程序软件，在凝胶成像（Gel Imaging）对话框中选择Chemi（化学发光）应用程序；

• 在成像区域（Imaging Area）对话框中的下拉菜单里选择合适的样品大小（非必需）；

• 选择成像曝光（Image Exposure）方法可以人为估计曝光时间并手控设定（Manual Exposure），或者使用信号累积模式（Signal Accumulation Mode，SAM）；

• 手控曝光（Manual Exposure）

• 选择手控设定曝光时间（Manually set exposure time）并在读秒框中输入曝光时间。

• 选择Highlight saturated pixels 。

• 把胶置于透射箱的中心位置。

• 在程序窗口中点击 按钮。

• 在显示器上看样品的实时图像时，打开的成像仪的门并手工移动样品直至它位于视野的中心区域。

• 如果必要的话，利用照相机的变焦滑板调节成像区域的大小。

• 选择按钮获得第一个成像（如果您所需的图像在计算机的显示器上出现，寻找图像中的不能定量的红色的饱和区域。如果您看到了饱和区域，请重新用一个较短的时间成像）。

• 信号累积模式（Signal Accumulation Mode，SAM）

• 如果预估方法不足以精确满足您的目的，请选择SAM按钮，然后按Setup按钮。跳出来一个新的对话框，输入细分的成像时间的领域以及获取的成像的数目。

• 选择按钮然后再选择按钮，在所设定的“First image time(sec)”时第一个图像出现在主程序窗口，同时一个小的缩略图将出现在窗口下方。这个过程将持续至所有的图像都被获得。也可以通过使用位于程序窗口左边的图像转换窗口（Image Transform）中的调节划片改变图像的表观。在SAM程序中的任何地方都能通过点击缩略图查看图像。

• 如果您发现一个符合您要求的图像，点击按钮放弃其它的不满意图像，删除在缩略图窗口中的其它图像，也可在SAM获得期间或之后通过右键单击缩略图窗口内的任意图像并命名保存在您的系统里。

• 在决定获取图像的数量时，注意增加SAM图像会导致背景信号的减弱。当较多的图像被获得时，在背景强度水平附近的弱的信号将会变得难以识别。如果辨别最弱的信号很重要，推荐在合适的时间下获得单一的成像。

Thermo 酶标仪操作规程（Multiskan FC型）

• 操作规程

• 打开电源，等待仪器完成开机自检。

• 创建程序。在主菜单界面下按FILE键，选择New，然后按OK键确定。

• 使用下箭头选择主菜单界面中的“Measurement”，按OK键确定。“Filter 1 (nm)” 项目上按OK键确定并使用下箭头选择检测波长，然后按OK键确定。按F1 键接收选择并返回到主菜单。

• 设置孔板布局。使用右箭头选择”Processing”，按 OK 键打开布局窗口，使用方向键选择要填充的孔，按 OK 键进入填充界面，按OK 键在下拉菜单中定义填充样品的类型“Well type”、填充方向“Fill direction”和数目“Number of”。对于标准品“Calibrator”、质控品 “Control”和待测样品“Unknown”来说，可以设定复孔数“Replicates”和复孔填充方向“Replicate direction”。

• 回到主菜单界面，按FILE 键，选择Save As，然后按OK键，通过数字键“到”输入名称，然后按OK键确定。

• 运行程序。按PLATE in/out键，仪器自动出板，放入微孔板， 其中A1 位对准微孔板托架的左上角。按STRAT启动程序，仪器自动进板。

• 如需打印或导出数据，在界面中按FILE 键，选择Print Results （打印）或Export Results As Text，将U盘插入U盘插口（导出），按OK键确定。

Miltenyi 流式细胞仪操作规程（MACSQuant Analyzer 10）

• 开机步骤

• 连上主电源，打开流式细胞仪右下角主开关，“I”表⽰开，“O”表⽰关。

• 轻触显⽰屏，电脑自动打开MACSQuantifyTM软件。

• 选择用户帐号输入密码，点击log，机器⾃动进入Data Analysis mode。

• 点击图标，选择‘Acquisition mode’打开流式细胞仪(⾃动启动激光和液流)。

• 机器最好预热至少30 min，然后即可进行荧光分析。注：预热等待时间内，建议执行⼀次清洗操作，详细请参阅后面‘rinse, flush, and clean程序’。

• 机器状态可以从hardware monitor窗口或者status bar查看。详细信息请参阅用户手册。

• 关机步骤

• MACSQuant具有自动关机功能，设置自动关机时间请选择： Edit>Options>Software>Timers>StandbyTimer。

• 在获取模式下进行手动关机，请点击图标。

• 选择‘Instrument off’，机器会执行⼀次清洗循环，然后泵入storage solution浸满管路，并关闭激光器和MACSQuantify软件。

• 选择‘Data Analysis Mode’，机器会执行⼀次清洗循环，然后泵入storage solution浸满管路，并关闭激光器。软件仍处于打开状态，可以进行数据分析或数据拷贝等工作，结束后同样操作选择‘Instrument off’关闭软件。

• 机器关闭后，显示屏会处于待机状态。轻触显示屏后能重新打开MACSQuantify软件。

• 日常维护工作

• MACSQuant®各种缓冲溶液MACSQuant机器配有4个溶液桶，分别为Running Buffer、Washing Solution、Storage Solution和Waste Bottle。

• ‘Rinse, flush, and clean’程序。Rinse程序：检测完⼀管制备的不是很好的样本(如粘连细胞或死细胞较多)，建议执行⼀次Rinse程序，点击状态栏里图标，机器会驱动Running Buffer清洗液流系统。Flush程序：当发现管道有堵塞现象时，建议执行⼀次Flush程序，右击状态栏⾥的图标，选择‘Flush’键，机器会泵入Washing Solution浸满流动室，孵育反应几分钟后将液体和堵塞物⼀起倒冲出管道系统，该程序需要⼤概16 min。Clean程序：Clean是比Rinse更彻底的清洗程序，或者配合Flush程序清除堵塞物。右击状态栏⾥的图标，选择‘Clean’，然后根据提⽰操作，该程序会用到MACS® Bleach Solution，需要大概10 min。

Bio-Rad核酸蛋白测量仪操作规程（Smart Spec plus 型）

• 操作规程

• 开机后不要堵塞后面散热孔，不要盖任何罩子，以免热量散发不出去烧坏氙灯或仪器。

• 开机后仪器会自动对有关检测组件和功能进行自检。如果自检有问题请联系Bio-Rad维修服务中心800-820-5567。

• 自检通过后可以按Setup进行光程、日期、背景扣除等参数设定和选择需要功能根据屏幕提示进行测量操作。

• 注意仪器缺省状态为10mm光程，如使用其它光程(1nm、2nm、5nm)比色杯可以在Setup中设置相应光程。光程越长灵敏度越高，如果样品含量较低尽可能选用长光程比色杯。

• 在仪器屏幕中可以直接显示有关操作的简单说明，有关细节可以进一步参考Quick Guide或说明书，说明书遗失可以从www.bio-rad.com下载。

• 比色杯放入样品槽之前要用滤纸小心吸干比色杯外表面的溶液，不要划伤或弄脏透光面，不要污染样品槽。

• 操作比色杯时，请佩戴手套，任何时候请勿触摸比色杯透光面。

• 关机后等氙灯冷却后再盖防尘罩，以免热量散发不出去烧坏氙灯或仪器。

Bio-Rad半干转印系统操作规程（Trans-Blot SD 型）

• 操作规程

• 准备好转印缓冲液（参看说明书，不同样品缓冲配方不同），把凝胶在缓冲中平衡20-60分钟

• 剪好合适尺寸的转印膜，在缓冲中浸5-10分钟

• 剪好合适尺寸的滤纸（2张增厚滤纸或4张厚滤纸或6张薄滤纸）用缓冲液浸湿

• 在阳极平板上根据图中顺序做好转印三明治，注意不能有气泡

• 装好阴极平板，合上安全盖

• 接上合适的电泳仪开始转印。注意电极连接（正对正，负对负）,根据不同的蛋白摸索最合适的转印条件。常规推荐：小胶用10 V 30 minutes 或15 V 15 minutes；大胶用25 V 30   minutes 或15 V 60 minutes；注意大胶不要超过 25 V电压和 3 mA/cm2电流，小胶电流不要超过 5.5 mA/cm2

• 7. 关闭电泳仪，打开安全盖和阴极电极，取出转印膜

注：对于一些用酸性缓冲液的转印，需把凝胶放在膜上，其他同上。

倒置生物显微镜操作规程（XDS-1B 型）

• 操作规程

• 开机

• 观察

• 将待观察对象置于载物台上；

• 调节双目目镜距离，舒适为宜；

• 调节光源；

• 选择合适倍数的物镜

• 旋转物镜转换器选择合适大小的物镜（切勿直接扳动物镜）；

• 通过依次调节粗/细准焦螺旋得到清晰的成像。

• 关机

取下观察对象，推拉光源亮度调节器至最暗，关闭电源开关。

• 在使用显微镜观察样品后，对接触样品部分进行清洁，防止造成污染

• 登记使用记录

• 日常维护及注意事项

• 所有镜头表面必须保持清洁，落在镜头表面的灰尘，可用吸耳球吹去；当镜头表面沾有油污或指纹时，可用脱脂棉蘸少许无水乙醇和乙醚的混合液（3:7）轻轻擦拭；

• 勿用棉团、干布块或干镜头纸擦试镜头表面，否则会刮伤镜头表面，严重损坏镜头；

• 勿用水擦试镜头，否则会在镜头表面残留水迹，可能滋生霉菌，严重损坏显微镜；

• 尽量远离易燃物品，尤其是电源开、关时，避免着火；

• 不允许随意拆卸仪器。

Thermo 纯水仪操作规程（Genpure UV/UF 型）

• 操作规程

• 按主功能键到I状态，将系统打开

• 系统界面将会显示仪器所在的状态。界面显示是：“UV/UF”

• 仪器的电子系统将会从新设定，并且检验校准。（将按出厂初始设定）如果校准正常，将会显示“通过校准”。然后显示：“Self Test(in progress) Self Test Passed.”最后，显示10（± 0.2）兆欧·cm。这是校准的参考值。

• 通过START/STOP键，将仪器从待机状态转到正常模式。仪器泵将会从新启动。

• 仪器将会显示产出水的电阻率：…..兆欧·cm，直到系统中的气体排空。

• 直等制得的水符合要求

• 工作期间，仪器处于开机或待机状态（参见待机模式）

Olympus显微镜操作规程（IX 53 型）

• 透射光明场（BF）观察

• 主机电源开关打开，灯室电源打开

• 如果有相差/DIC/荧光等附件全部移出光路，使光路畅通

• 放置样品在载物台上，选择物镜

• 适当调节光阑大学，聚焦

• 如需拍照，光路选择拉杆拉到拍照位

• 相差（PH）观察

• 明场正常情况下，打开电源

• 放置样品在载物台上

• 选择物镜，选择物镜对应的相差环

• 适当调节光阑大小

• 聚焦、观察、拍照

• 微分干涉衬（DIC）观察

• 明场正常情况下，打开电源

• 放置样品在载物台上

• 选择物镜

• 将（起偏镜、检偏镜、DIC棱镜）插入光路，将于物镜对应的DIC环移入光路

• 调节光强，聚焦

• 适当调节DIC棱镜

• 观察、拍照

• 反射光荧光（FL）观察

• 明场正常情况下，打开电源

• 先用明场/相差寻找样本

• 关闭明场电源，打开荧光电源（记录荧光使用时间）

• 选择激发块，打开光闸

• 聚焦、观察、拍照

• 注意：拉上窗帘，形成暗室（荧光电源的开关间隔时间应大于每次30分钟）

• 日常维护及注意事项

• 所有镜头表面必须保持清洁，落在镜头表面的灰尘，可用吸耳球吹去。

• 当镜头表面沾有油污或指纹时，可用擦镜纸沾少量擦镜液轻轻擦拭（无水乙醚（70%）和无水乙醇（30%）混合）

• 不要使用有机溶剂擦拭显微镜非光学部件，如果要清洁这些部件，请使用一块无毛柔软的布沾少量中性清洁剂擦拭。

• 不能用棉团或镜头纸干擦拭镜头表面，否则会刮伤镜头表面，严重的会损伤镜头。

• 不要擅自拆开显微镜的任何部分，这会导致性能降低或功能失灵。

• 显微镜尽可能不移动，若需移动应轻拿轻放，避免碰撞。

• 不使用显微镜时，请使用防尘罩盖上显微镜，盖上显微镜前，一定要等待灯座充分冷却。

• 发现其他故障，请及时金百利国际娱乐菲律宾真管理员或联系我们，不要自行处理。

Zeiss激光共聚焦显微镜（LSM 700）

• 激光共聚焦扫描显微镜开机顺序

• 打开电源。

• 打开激光柜上方插座开关，打开激光柜背侧下方的电源开关，并将激光柜正面的钥匙旋至水平位置。

• 打开电脑背侧总开关，如有需要打开活细胞培养系统的开关。

• 打开显微镜开关。

• 打开荧光照明器开关。

• 打开电脑，启动操作系统，选择用户LSM User。待操作系统完全启动后，双击桌面上的软件图标ZEN，点击Start System按钮，启动系统，开始实验。

• 激光共聚焦扫描显微镜关机顺序

• 保存图像，退出软件。关闭电脑及显示器电源。

• 关闭荧光照明器电源。先后关闭显微镜系统电源及其他相关附件电源。

• 将激光柜正面的钥匙旋至竖直位置，并关闭激光柜背侧电源。

• 等灯箱充分冷却后，再放防尘罩。

• 关闭电源。

• 日常维护及注意事项

• 打开电源时，应等待2 分钟（电压稳定）后，再开其它开关。

• 严格遵守[激光柜]的开、关流程（详见“开/关机顺序”）。

• 如果使用过[油镜]，或者物镜表面较脏，则需用[擦镜纸]擦干净物镜的前表面（小滴瓶内有清洁液）。

• 避免频繁开/关荧光灯，X-cite 100设备打开/关闭须间隔30min以上。

• 必须等灯箱充分冷却后，再小心地盖上[防尘罩]。

• 显微镜可由[TFT触摸屏]控制，使用触摸屏时注意：

  •  ①手指保持清洁、干燥状态，并且为了保证他人使用安全，触摸时严禁配戴有可能接触污染物或危险样品的手套；

  •  ②触摸屏已足够灵敏，不要大力按压触摸屏；

  •  ③不要旋转、插拔触摸屏。

• 刻录图像数据资料：应使用刻录光驱刻录，实验前应准备好刻录光盘。

  • 切记！！为了防止计算机病毒，严禁在共聚焦电脑上使用U盘、硬动硬盘或者上网。

• 未经授权，严禁自行安装任何软件。

• 实验室温度应保持在22℃±2℃，湿度40%-60%。

• 整个实验过程应注意保持显微镜周围环境清洁。

• 安全事宜

• 激光与普通光源不同，其亮度高、方向性好，能量密度大等特殊性质，可能对使用者的人身安全构成威胁。LSM700所配常规激光器均属于3B级激光。

• 全功率激光光束直接入眼或照射皮肤会造成视网膜或皮肤的损伤，光滑表面，如手表，戒指，或镊子等，造成的镜面反射同样会对人体造成类似伤害。但粗糙表面，如擦镜纸，造成的弥散反射通常是安全的。

• 不要在扫描过程中直接将手置于光路中。

• 扫描时，不要将易燃物品放置在光路中，如擦镜纸或棉签。

Bio-Rad半干及湿式转印系统（Trans-Blot SD 型）

• 操作规程

• 准备好转印缓冲液（参看说明书，不同样品缓冲配方不同），把凝胶在缓冲中平衡20-60分钟

• 剪好合适尺寸的转印膜，在缓冲中浸5-10分钟

• 剪好合适尺寸的滤纸（2张增厚滤纸或4张厚滤纸或6张薄滤纸）用缓冲液浸湿

• 在阳极平板上根据图中顺序做好转印三明治，注意不能有气泡

• 装好阴极平板，合上安全盖

• 接上合适的电泳仪开始转印。注意电极连接（正对正，负对负）,根据不同的蛋白摸索最合适的转印条件。常规推荐：小胶用10 V 30 minutes 或15 V 15 minutes；大胶用25 V 30   minutes 或15 V 60 minutes；注意大胶不要超过 25 V电压和 3 mA/cm2电流，小胶电流不要超过 5.5 mA/cm2

• 当使用湿式转印系统时，请注意冷却缓冲液，转印过程应在冷房内完成或使用冰袋冷却装置降低温度。常规推荐：100V 30-120minutes

• 7. 关闭电泳仪，打开安全盖和阴极电极，取出转印膜

注：对于一些用酸性缓冲液的转印，需把凝胶放在膜上，其他同上

Eppendorf台式多功能高速离心机（5430 型）

• 离心机操作面板（显示屏）符号

1. 程序号； 2. At set rpm 定速计时功能键显示；3. 离心参数锁定显示

4. 有声/ 静音状态显示； 5. 离心盖状态显示； 6. 当地时间

7. 软刹车功能显示； 8. 样品离心时间、转速/相对离心力显示； 9. 额外信息显示（可选）

10. 相对离心力/ 转速显示； 11. 离心持续时间

• 离心机常规操作

• 开机：

• 接通离心机电源，并打开电源开关（机身后面），离心机盖自动打开，离心机准备就绪并显示上次的离心参数。

• 离心操作：

• 沿转子轴垂直插入转子，使用匹配的扳手顺时针方向旋紧转子

• 约2 秒钟后，离心机自动识别转子，并将转子信息显示于显示屏

• 根据转子的承载能力，配平装入样品和适配器（若需要的话），并旋紧转子盖合上离心盖，设定离心速度和时间后，按Start / Stop 键开始离心

• 离心机功能操作

• 设定时间离心：

• 按time（时间）键设定离心时间

• 按speed（速度）键设定转速（rpm）或相对离心力（rcf）

• 按start/stop 键启动离心

• 离心停止后，取走离心样品

• 持续离心：

• 按time（时间）键至超过99 分钟或低于30 秒，当屏幕出现“_” 后，表示持续离心

• 按speed（速度）键设定转速（rpm）或相对离心力（rcf）

• 按start/stop 键启动离心

• 按start/stop 停止离心

• 离心停止后，取走离心样品

• 瞬时（short spin）离心：

  • 按speed（速度）键设定转速（rpm）或相对离心力（rcf）

  • 持续按住short 键启动瞬时离心

  • 放开short 按键停止瞬时离心

  • 离心停止后，取走离心样品

• 断电状态下开启离心机盖 （紧急开盖）：

• 断电后离心机机盖不能打开，可通过手动操作打开离心机盖。操作时需拔下电源线，透过机盖上的透明窗口观察转子完全停转后，方可进行。取下位于5430 左右两边的白色塑料小帽，使用离心机配备的普通扳手如箭头方向各旋转5 - 10 圈，即可开盖。

（此操作请由本实验平台仪器负责老师来完成！）

Eppendorf台式多功能高速离心机（5810R 型）

• 离心机常规操作

打开离心机侧面主电源开关，配平后对称装载转子，关闭离心机盖，此时OPEN键亮蓝灯。

按键，显示“speed”

设定转速（rpm）数值，假如需设定相对离心力（rcf）数值，需要先输入离心半径

重复按此键，直到rcf标志（*） 出现，用箭头键改变其值

按键设定离心温度（仅限冷冻离心机），用箭头键改变温度值，以°C显示

按键，启动离心

• 注意事项

• 5810/5810R型最大样品容量1600ml

• 离心机旁边须预留15cm，后部预留10cm，保持环境通风并防止直接日照

• 对于5810R 型，须安装4小时后才能开机，以防对压缩机造成损害

• 安装好转子，并用配套的起子顺时针拧紧转子和转子盖（非气密性的转子F-45-30-11只需轻按即可安装到转子上，无需用起子拧紧），否则严禁运转

• 转子和吊篮应该对称安装，离心样品必须配平后对称装载，并使用匹配的适配器，水平转子必须采用同一类型的吊篮。如果转子没有满载，吊篮中管子离心管的位置按照图1，方式放置。

• 如果采用大尺寸的离心管（如长于100mm)，必须事先用空管手动测试转子的运转

• 若液体泄露在离心机腔体或转头内，必须用湿布和中性肥皂溶液清洁

• 离心机达到最大转速时，离心液体的密度绝对不能超过1.2g/ml

• 确保转头不受机械损伤，因为即使轻微的划伤和裂纹也会对转头材料造成严重的内部损伤

• 避免使用侵蚀性、有毒性、放射性的液体或致病细菌的试剂处理转子，一旦被污染必须立即用中性清洗液清洁

• 定
  
  期用中性清洗液（例如：中性Extran或中性RBS）清洁转子，延长其使用寿命

图1 ：正确装载方式，转子对称装载                      图2：错误的装载方式，吊篮装载不对称，吊篮枢轴受力不均。

• 断电情况下打开机器

• 断电会造成自动开盖失灵，请使用手动紧急开盖

• 关闭主电源，等转子停稳（转子最多持续运转8分钟），将六角扳子插入仪器正面中下部的螺钉孔中，反时针旋转可解开门锁（用完后一定要取出扳子）。

（此操作请由本实验平台仪器负责老师来完成！）

Agilent 1290液相色谱-6545 Q-TOF质谱

• 注意！

  • 因质谱仪内部组件容易被污染，请务必用恰当的方法对样品进行预处理，如高速离心、高质量的滤头过滤（0.22μm）、固相萃取等，且样品浓度符合要求范围。提前清洗所使用的色谱柱。

  • 每天用50％的异丙醇水溶液清洁离子源。

  • 流动相不得使用非挥发性盐类（如磷酸盐等）以及酸类，禁止使用三乙胺、表面活性剂、离子对试剂等。

  • 禁止随意调整进样针高度，使用Agilent进样瓶及内插管；样品制备容器及进样瓶等禁止使用肥皂水等清洗。

  • 做完样后请冲洗液相管路（断开液相与质谱之间的管线），冲洗完毕后将仪器Standby。

  • 如因操作不当造成的任何仪器损坏，由该操作者所属的实验室负责。

• 准备

  • 检查溶剂瓶中洗针溶剂及流动相溶剂是否够用，废液罐是否已满。

  • 水相使用MILLI-Q系统纯化的高纯水并每天更换；有机相使用进口色谱纯试剂；过滤流动相并脱气。

  • 样品预处理，并在分析前高速离心。样品必须澄清透明无肉眼可见固体及絮状物。

• 开机

  • 打开计算机，进入windows操作系统。

  • 运行MassHunter Data Acquisition。

  • Purge所需分析的流动相通道，单通道及混合通道用5mL/min流速各Purge 5min。

• 分析

  • 分析前进行仪器校准。请勿擅自操作。

  • 选择合适的离子源参数、液相条件等建立操作者自己的方法，请参照培训手册。

  • 建立自己的Worklist，保存并运行该序列。

• 关机

  • 清洗流路系统，直至背景降至合适的数值。

  • 将MassHunter Data Acquisition转至Standby状态。

8. 平台的各项管理规则制定

8.1仪器设备运行管理办法

仪器设备运行管理办法

第一章 总 则

第一条  细胞与分子生物学实验平台（以下简称平台）为保障仪器设备的正常运行，提高仪器设备的使用效率，为我校师生科研提供服务，特制定本办法。

第二章 开放的仪器及设施

第二条  共聚焦显微镜、流式细胞仪、测序仪、玻片扫描仪、液质联用仪酶标仪、荧光显微镜、高灵敏度化学发光成像系统、超纯水仪、超速离心机等仪器及细胞房等设施（详见附件2）。

第三章 收费标准、支付办法

第三条  平台实行学校运行经费补贴下的适度收费制度。

第四条  收费标准的制定

平台参考国内其他高校同类仪器测试收费标准，本着“优惠校内、兼顾校外”的原则，制定收费标准，报相关校领导批准后执行，详见附件1：《仪器使用规则》；附件2：《测试收费标准》。

第五条  费用支付办法

所有测试费用由经费卡或以现金支付直接入学校指定的本平台专有账户，由学校财务根据需要开具相关发票或收据。

第六条  测试收入的使用

测试收入主要用于平台仪器设备的运行和基本维护等。平台负责定期统计测试资费，于每年的1月15日在网上公示上一年度的收入与支出情况。

第四章 测试服务

第八条  开放时间：星期一至星期五，每天8:30到17:30，夜间及节假日视测试预约情况安排。

第九条  测试预约：实行网上登记预约方式（网址：http://202.119.189.203/），按预约时间先后安排测试时间；至少提前一天在线填写申请，备注中写明课题来源、测试目的和内容、经费来源、送样人联系方式。

第十条  样品要求：测试用户按照相关仪器的要求，自行制备样品。

第十一条  测试方式：采取平台专人操作和培训上机的方式。

第五章  附则

第十二条  本办法从颁布之日起实施，未尽事宜由细胞与分子生物学实验平台（中国药科大学）负责解释。

细胞与分子生物学实验平台（中国药科大学）

2015年1月1日

附件1

仪器使用规则

（1）专管共用、开放共享、有偿使用：

平台仪器的运行本着“开放、共享、专管、有偿使用”原则，为全校以及外单位的科研和教学工作提供开放服务，并根据实际情况进行有偿使用（校内采用定期结账方式）。

（2）网络预约，先约先用，共享资源：

所有仪器设备的使用及运行为体现“公开、透明、共享”原则，可通过中国药科大学门户网站（http://www.cpu.edu.cn/），登录天然药物活性组分与药效国家重点实验室大型仪器共享平台网站（http://202.119.189.203/）进行注册及预约使用。

（3）专人管理，责任到人：

平台大型仪器和功能实验室须由专职技术人员全面负责仪器设备的预约、收费、培训、维护及维修等事宜。

（4）预约审核，规范使用：

申请使用人员通过上述网络系统预约相关仪器并经专职技术人员审核后，使用时须严格按仪器操作规范操作，并做好使用登记和卫生清理工作，一旦发现仪器出现故障或异常情况，需第一时间向专职技术人员报告。

（5）培训先导，许可认证：

由平台指定详细的培训计划，包括大型精密仪器培训计划、细胞培养技术培训计划及分子生物学操作等培训计划，操作人员根据自己需求选择相关的培训计划，经课题组长及专职技术人员审核同意后提交仪器平台备案，经过培训及考核合格后，方可准许上机操作。

附件2

测试收费标准

8.2实验技术人员守则

实验技术人员守则

第一条 实验技术人员是实验室人员的重要组成部分，负责对实验室的重大设备和精密仪器进行日常维护与运行管理，配合实验室研究人员开展高水平的科研与技术发明、创新。为不断提高和促进细胞与分子生物学实验平台（以下简称：平台）实验技术人员的业务水平，发挥实验技术人员的专长，更好地为科研和教学工作服务，特制订实验技术人员岗位职责。

第二条 自觉遵守国家各项法规及学校和平台的规章制度；忠于职守，爱岗敬业，按时上班，不无故缺席，认真完成本职工作，以饱满的热情为师生服务。

第三条 具备团结协作精神，协助实验室主任做好实验室的计划、招标和设备的验收、入固定资产、编号、登记等工作，共同完成实验室的各项其它工作。

第四条 努力钻研业务，不断提高实验技术水平，掌握平台仪器、设备的工作原理和各项操作、测试技能，能对实验测试数据进行分析和处理，充分发挥仪器的作用，大型仪器保证每年培训一次，协助各位导师指导研究生实验，做好科研和教学实验工作。

第五条 为保证服务质量，避免不必要纠纷与意见，不在对外服务的工作时间（周一至周五：8:30-11:30；13:30-17:30）从事与自己发展相关的基础研究和应用开发工作。其它时间如需为自己的提升而开展研究工作，不能以自己所管理的仪器为主要研究手段，如有冲突需申请调离并帮助培训其他管理人员，使用公共仪器必须与实验室成员一样进行登记，并交纳仪器使用费。

第六条 做好仪器设备的安装、维护、保养工作，能对本实验室仪器、设备的常见故障进行诊断和维修处理；妥善保管相关文件、图像等档案资料和相关配件、驱动程序等。

第七条 维持仪器的正常运转；定期对仪器的使用人员（教师、研究生及担负本实验室开放课题任务的学者等）进行仪器的正确操作程序的培训；保证仪器故障在48小时内排除或报修；监督仪器使用人员的使用过程。

第八条 做好平台公共仪器的使用登记与收费工作，及时发送规范的收费单，并完成大型仪器对外开放的测试工作，为用户提供及时技术服务和准确可靠的分析测试结果。

第九条 保持平台清洁、卫生和良好通风，创造安静良好的工作、实验环境，不在实验室内聊天、下棋、打牌和做其它与实验无关的事。

第十条 节约用水、用电、爱护平台的各种设施，防火、防盗、防潮、防事故，保证实验室安全。

第十一条 对来室工作人员进行各项规章制度的讲解和教育，不带闲杂人员进入平台。

细胞与分子生物学实验平台

2015年1月1日

8.3固定资产丢失、人为损坏事故处理规定

固定资产丢失、人为损坏事故处理规定

第一条固定资产安放的场所应完善安全保卫措施，特别是安放贵重仪器设备的场所必须加装安全防盗门和监控设备。

第二条固定资产发现丢失，使用单位应保护好现场并及时向学校保卫处报案，迅速组织查找，同时向实验室与设备管理处报告。因使用不当造成仪器设备人为损坏，应立即报告主管部门。损坏严重的要保护现场，查明原因，明确责任。事故发生后，实验室应积极组织抢修，恢复使用功能，无法修复或无维修价值的，可按仪器设备报废处理。

第三条对查无下落，确认丢失的仪器设备或因使用不当造成仪器设备认为损坏的，应填写“细胞与分子生物学实验平台固定资产丢失、人为损坏事故报告处理表”，分析原因，明确责任，由实验室和学院负责人提出处理意见，报送实验室处。仪器设备报失和人为损坏处理的审批权限限定如下：凡单价在1万元以下的由有关课题组负责人审批；1万元以上至10万元的由院领导审批；10万元以上由校主管领导审批。凡丢失、人为损坏的仪器设备必须上学校校园网公示。

第四条凡属下列原因之一而造成仪器设备人为损坏或丢失的，属责任事故。

1、不遵守制度，违反操作规程，以致仪器设备损坏者；

2、未取得操作合格证，未经管理人员或指导人员同意，不听从指挥，擅自动用，以致仪器设备损坏者；

3、违反规定，未履行申请批准手续，擅自拆卸仪器设备以致造成损坏者；

4、仪器设备保管不善，玩忽职守，以致发生灾害造成损失，或领用外借不按规定办理仪器设备外借手续，保管不当被窃者。

第五条凡属责任事故的要赔偿一定的经济损失，并根据情节的轻重提请学校给予相应行政处分，直至追究刑事责任。处理原则如下：

1、损坏仪器价值在一万元以下者，赔偿原价的百分之二十至百分之五十；

2、损坏仪器价格在一万元以上或重大事故者，视情节轻重，给予一定的经济赔偿和行政处分；

3、损坏仪器设备如能修复，其修理费不超过原价的百分之二十以下者，则可赔偿修理费；

4、因不负责任而丢失仪器者，按原价赔偿，每月扣缴本人工资的百分之五，直至赔清原价为止；

5、在执行赔偿过程中，视情节轻重、本人表现，报请领导审查验实，酌情予以减免部分赔偿。

第六条对损坏仪器设备和经济赔偿处理意见有意义的当事人，可以按照有关规定向学校提出申诉。

细胞与分子生物学实验平台

2015年1月1日